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液相色谱仪操作步骤和注意事项
一、操作步骤:
1)
首先对流动相进行过滤,根据需要选择不同的滤膜,一般为有机系和水系,常用的孔径为
0.20um
和
0.45um
。
2)
对抽滤后的流动相进行超声脱气
10-20
分钟。
3)
正常情况下,仪器首先用甲醇冲洗
10-20
分钟,然后再进入测试用流动相
(
如流动相为缓冲试剂,则要二次重蒸水冲洗
10-20
分钟,直至色谱柱中有机相冲净为止
)
。
4)
一般情况下,流动相冲洗
20-30
分钟后,仪器方可稳定,重要的是仪器基线走后,方可进样测试。
5)
同时进两针标样,将其结果相比较,其结果的比值在
0.98-1.02
之间后,就可以正式进行样品的测试了。
6)
样品测试结束后,就要进行色谱仪及色谱柱的清洗和维护。如流动相为缓冲试剂,同样也要用重蒸水清洗
10-20
分钟,方可用有机相进行保护,否则,有损色谱柱。
7)
关机时,先关计算机,再关液相色谱。
8)
填写登记本,由负责人签字。
二、
注意事项:
1)
流动相均需色谱纯度,水用
20M
的去离子水。脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。
2)
柱子是非常脆弱的,次做的方法,先不要让液体过柱子。
3)
所有过柱子的液体均需严格的过滤。
4)
压力不能太大,好不要超过
150kgf/cm2 .
5).
因为缓冲试剂遇有机溶剂,会结晶,有损色谱柱,所以,每次由有机相变流动相或流动相变有机相均需用蒸馏水清洗。
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