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蛋白质的检测方法
(一)蛋白质的盐析
取
1.5mL
蛋白质溶液,加入等体积饱和硫酸铵溶液(浓度为
50%
饱和),微微摇动试管,使溶液混合均匀后,静置数分钟,球蛋白即析出呈絮状沉淀(如无沉淀可再加少许饱和硫酸铵),用滤纸滤取上清液,滤液中再加入固体硫酸铵粉末至不再溶解,析出的即为清蛋白,再加水稀释,观察沉淀是否溶解。
(二)蛋白质的沉淀
1
.用重金属盐沉淀蛋白质
取三支试管,各加
1mL
蛋白质溶液,分别各加
3
滴
6%
醋酸铅溶液、
3
滴
2%
硫酸铜溶液和
3
滴
1%
硝酸银溶液,观察蛋白质沉淀的析出。
2
.用有机酸沉淀蛋白质
取二支试管,各加
1mL
蛋白质溶液,并加
5%
醋酸溶液使之呈酸性(该沉淀反应好在弱酸中进行)。然后分别滴加饱和苦味酸、饱鞣酸溶液,直至沉淀产生为止。
用
10%
三氯醋酸溶液、
3%
磺柳酸溶液进行类似实验(用量同前),观察现象。
(三)蛋白质的颜色反应
1
.黄蛋白反应
于试管中,加
1mL
蛋白质溶液和
10
滴浓硝酸溶液,直火加热煮沸,观察溶液和沉淀颜色。冷却后,再加入
20
滴
10%
氢氯化钠溶液,观察颜色变化。
2
.与茚三酮的反应
在二支试管中,分别加
1%
赖氨酸溶液和
1mL
蛋白质溶液,分别加
2
滴茚三酮溶液,加热至沸,观察有什么现象?
3
.与硝酸汞试剂作用
——
米伦反应
在二支试管中,分别加
1mL 0.5%
苯酚溶液和
1mL
蛋白质溶液,再各加
0.5mL
米伦试剂(不可太多),苯酚溶液出现玫瑰红色,而蛋白质溶液加热后出现沉淀,加热凝固的蛋白质呈砖红色,有时溶液也呈红色。
4
.蛋白质的双缩脲反应
(1)
双缩脲的生成
于干燥试管中,加
0.2g
~
0.3g
尿素,微火加热,尿素熔化并形成双缩脲,放出的氨可用红色石蕊试纸试验。试管内有白色固体出现后,停止加热。
(2)
双缩脲反应
上述产物冷却后,加
1mL10%
氢氧化钠溶液,摇匀,再加
2
滴
2%
硫酸酮溶液,混匀,观察有无紫色出现。
于试管中,加
1mL
清蛋白溶液和
1mL10%
氢氧化铜溶液,再加
1
滴~
2
滴
2%
硫酸铜溶液共热,由于蛋白质与硫酸铜生成络合物而呈紫色。取
1%
赖氨酸溶液作对照,观察颜色变化。
(
四
)
核蛋白组成的鉴定
1
.核蛋白的水解
取
20mL
酵母核蛋白混悬液于离心管中离心分离,弃去清液,将沉淀转入小烧杯中,加
15mL 5%
硫酸,盖上表面皿在水浴上煮沸约
1h
(煮沸过程中保持原有体积),水解毕,离心分离,取上层清液作以下检查。
2
.核糖的鉴定
于试管中,加
1mL 20%
间苯二酚盐酸溶液,以小火加热至沸,迅速加入
5
滴水解液,呈现红色,(如红色不显可再稍加热)。
3
.磷酸的鉴定
取
10
滴水解液,置于试管中,加
5
滴
7%
钼酸铵溶液和
2
滴浓硝酸溶液,小心于火上加热,即有黄色沉淀生成。
4
.嘌呤与嘧啶的鉴定
取约
4mL
水解液,置于小烧杯中,加入氨水至微碱性,过滤,在滤液中加
1mL 5%
硝酸银铵溶液,静置片刻,即有絮状的嘌呤或嘧啶银盐沉淀生成。
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