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实时荧光定量PCR技术及在我国卫生应急中的应用
实时荧光定量
PCR
技术(
Real-time quantitative Polymerase Chain Reaction
简称
Real Time PCR
,如果用于
RNA
检测,这被称为逆转录实时
PCR
即
Real-time RT-PCR
)是实时
PCR
法,它是指对
DNA
或经过反转入(
RT-PCR
)的
RNA
通过聚合酶链式反应并实时监测
DNA
的放大过程,在扩增的指数增长期就测量扩增产物,因为扩增指数增长期测量值与特异
DNA
(
RNA
)起始量存在相关性,从而实现定量检测。
Real Time PCR
的基本目标是测量和鉴别非常微量的特异性核酸,从而可通过监测
CT
值而实现对原始目标基因的含量定量。目前被普遍使用的多种常规
PCR
方法如各种凝胶电泳
PCR
法,终点荧光定量法或
PCR-ELISA
法叫做终点
PCR
法。实时荧光定量
PCR
法大的优点是克服了终点
PCR
法进入平台期或叫饱和期后定量的较大误差,实现
DNA/RNA
的定量。
普通
PCR
技术发明于
1983
年,而实时荧光定量
PCR
技术发明于上世纪九十年代并于
1996
年生产出了世界上台实时荧光定量
PCR
仪,实时荧光定量
PCR
技术得以实现的技术要素主要有荧光定量
PCR
试剂盒和实时荧光定量
PCR
仪,我国荧光定量
PCR
试剂盒研发实力强大,生产厂家较多,临床诊断的品种如
HBV/HCV
及禽流感诊断试剂盒性能、供应充足,基本实现国产化。在猪流感病毒
RNA
核酸序列明确的情况下,利用现有的试剂研发平台,人感染猪流感实时荧光定量
PCR
诊断试剂盒很快就会面世。实时荧光定量
PCR
仪由于技术含量高,只有少数几家中国企业有能力生产如西安天隆科技有限公司生产的
TL-988
系列仪器不但取得了发明、国家科学技术奖、国家重点新产品证书、医疗器械注册证,而且被国家发改委确立为国家高技术产业化示范工程
2008
年生物医学工程专项,产品性能达到******,在乳品检测行业市场占有率比进口仪器还高
[1-3]
。实时荧光定量
PCR
仪应用广泛,
1999
年开始,西方发达国家尝试将
PCR
应用于临床传染病诊断、食品**检测以及血液筛查,目前已相当普及。
2008
年
12
月
13
日中国卫生部下发《卫生应急队伍装备参考目录》(卫办应急发
[2008]207
号),其中要求县级以上卫生应急队伍建设中必须配备
PCR
仪和实时荧光定量
PCR
仪作为传染病控制类装备。
上海金鹏分析仪器有限公司
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